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毛细血管电泳仪取样技术要求很高,规范操作很重要

点击次数:49    发布时间:2021-02-24
   毛细血管电泳仪是一种用于生物领域的分析仪器,它以毛细管为分离通道,以高压DC电场为驱动力,利用带电粒子之间的迁移率差和分布系数差进行分离。它的出现使分析科学继液相色谱之后又一次大的进步,使分析科学从微升级到纳米升级,不仅使单细胞甚至单分子分析成为可能。用于分析时,取样技术要求很高,用户在使用时应规范操作
  1.注射区越小越好:
  无论采用何种进样方式,毛细管插入样品溶液的深度一般小于毛细管总长度的1% ~ 2%,以尽量减小样品溶液被毛细吸收到毛细管中的影响样品管中的溶液小于5L,进样量为1 ~ 50 NL。
  2.注射时间应该短:
  通常注射时间为0.5 ~ 1s,此时粘附在毛细管上的样品量相对于吸入量可以忽略不计。
  虽然毛细血管电泳仪的进样时间可以达到0.1s,但当毛细管插入样品管时,不可避免地会有一些溶液粘附,因此进样时间短会影响分析的重复性。
  3.样品的预浓缩:
  受毛细管总体积的限制,毛细管电泳不能像高效液相色谱那样通过增加进样量来提高检测灵敏度,但可以采取一些措施来提高灵敏度。
  首先当样品缓冲液的电导率明显低于电泳缓冲液的电导率(100倍以上)时,在毛细管两端施加电压后,可在样品区带前后形成较大的电场,使样品溶液中的分子迁移更快。当这些分子到达电泳缓冲液的边界时,由于电场的减弱,迁移速度变慢,使得样品区带变窄,浓度增加,从而达到浓缩的目的。
  其次当样品缓冲液的电导率与电极缓冲液相同,且样品浓度相对较薄,不适合进一步稀释时,可在注射前吸入部分水,也可达到浓缩的目的。
  不管采用什么样的进样方法,上述方法都能使样品积累和浓缩。然而由于堆积区地区的电位急剧下降,该地区的温度将会上升。
  4.将毛细管插入样品溶液后,应立即开始取样操作,完成后,应迅速移至缓冲液中开始电泳。否则,会出现毛细和虹吸现象,导致误差和光谱带变宽。
  5.尽可能保持系统不变。因为温度直接影响粘度,所以影响恒定的注入量。
  6.请勿将电极与毛细管接触,样品池和缓冲池的液位高度应保持平衡。
  7.防止样品溶液和缓冲溶液蒸发和损失。
  8.样品溶液中的溶剂必须与缓冲溶液互溶,前者的离子强度应低于后者。

毛细血管电泳仪

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